ПЦР на гепатит: качественный и количественный анализ

Что такое РНК-анализ на гепатит С?

ПЦР гепатит С имеет и другое название – РНК-анализ. Такое название объясняется тем, что в вирусе присутствует частичка РНК. Этот микроорганизм способен мутировать.

Все генотипы вируса характеризуются дифференциальной резистентностью, именно поэтому каждому пациенту назначаются разные методы терапии и в каждом индивидуальном случае дальнейший прогноз может отличаться.

В качестве исследуемого материала выступает кровь из вены. ЕЕ нужно сделать на голодный желудок. Обычно тестирование осуществляется методом Real-Time PCR, но также может использоваться тест COBAS AMPLICOR. В не зависимости от выбранного типа исследования крайне важно учесть порог чувствительности, то есть возможность реагента определить саму малую концентрацию вирусных частиц в крови.

Если показатели нормальные, то в расшифровке теста будет указано “не найдено”.

Количественный ПЦР гепатита С

Стандартная норма гепатита С – это размеры от 40 до 60 нм, с большинством липидов, поражение печени в результате острого или хронического течения болезни.

Гепатит С, а именно РНК-вирус семейства Togaviridae, крайне стойкий, передается путем переливания крови или использования нестерильных предметов, неправильная гигиена ванных принадлежностей и др.

Количественный анализ позволяет исследовать кровь и выявить генетическую структуру инфицируемого вируса.

Чтобы гепатит С и его генотипы были определены, проводят количественный анализ. В зависимости от анализатора могут определить три уровня заболеваемости РНК-вирусом.

АлАТ, АсАТ; ЩФ; ЛДГ.

Обратив внимание на результаты этих показателей и общее состояние организма, выводится результат, показывающий степень зараженности, форму, а также количество клеток гепатита С в крови. Это способствует процессу выздоровления и эффективности противовирусной терапии.

Полиразмерная цепная реакция (ПЦР) дает представление о количестве частиц ДНК во взятых у пациента анализах, при этом правильно определит возбудителя инфекции.

При том, что длительное время симптомы вируса могут маскироваться, человек может не ощущать начала течения болезни.

Качественный и количественный анализ ПЦР на гепатит С

Но при тщательном обследовании в 60–70% случаев выявляется гепатит С, первоочередный анализ, при котором – это ИФА, затем следует ПЦР диагностика.

Анализ проводится в определенные периоды, чтобы определить стадию заболевания и назначить соответствующее лечение. Обойтись без этого, не применяя все эти процедуры, можно, прививаясь от гепатита.

Анализ, включающий ПЦР-диагностику, предоставляет картину болезни, то, насколько активен вирус в разные периоды развития.

Сначала идет качественный анализ, который лишь подтверждает гипотезу насчет инфицирования, а затем количественный, определяющий нагрузку на печень. Идеальным вариантом будет отрицательный результат на гепатит С в генетическом материале пациента.

Качественный и количественный анализ

При обнаружении вируса делают количественный анализ, другими словами, вирусную нагрузку, определяющую концентрацию вируса в крови и тяжесть заболевания.

Вирусная РНК, находящаяся в определенном количестве крови, определяется как норма из расчета 1 мл на 1 сантиметр кубический. После количественного определения вирусной нагрузки можно судить о степени заражения еще неинфицированного окружения. Как только концентрация гепатита С повышается в крови, от окружения нужно изолироваться.

  • Задача определения количества вирусной нагрузки в крови пациента – это выявление степени заражения для окружающих.
  • Анализ на гепатит С
  • позволяет оценить эффективность противовирусной терапии, уровень заразности и количество инфицированных тканей.

Важно не допустить прогрессирования болезни, вовремя принять меры по профилактике, назначить правильное лечение на основе ПЦР-диагностики. Если по результатам уровень вирусной нагрузки менее 400 тысяч МЕ/мл, значит концентрация может быть минимальной, что говорит о возможном полном выздоровлении.

Норма для положительного результата – это отсутствие инфекции.

Ответ положительный означает наличие в биологическом материале инфекции. Анализ позволяет определить точное количество инфицированных клеток. Отрицательный ответ говорит об отсутствии инфекции, которую тщательно искали в организме.

Метод количественного определения на гепатит С является точным и информативным, проводится на оборудовании с высокой чувствительностью. Расшифровка результатов анализа позволяет узнать есть ли инфекция и ее специфику, увидеть наименьшее количество инфицированных клеток на высокочувствительных анализаторах.

Анализ ПЦР гепатит С – это исследование, основной целью которого является идентификация генетического материала возбудителя. Анализ выявляет возбудитель заболевания методом использования полимеразной цепной реакции. Данная диагностика отличается высокой степенью точности, специфичностью к выявлению отсутствия или наличия вирусной инфекции.

Чтобы провести ПЦР анализ на определение вируса гепатита С у пациента берётся венозная кровь, которая потенциально содержит в себе РНК (рибонуклеиновая кислота) HCV искомого вируса.

Тест ПЦР на гепатит С подразумевает порядок действий, когда в частицы крови пациента добавляют:

  • праймеры (короткие искусственно-синтезируемые участки необходимо гена);
  • специальный фермент (РНК-полимераза).

ПЦР на гепатит: качественный и количественный анализ

После забора биологический материал отправляется на исследования в лабораторию. Одна порция крови нужна для проведения непосредственно ПЦР анализа, вторая – отправляется на исследование по методу ИФА.

Фермент способен за короткое время увеличить численность генетического материала вируса возбудителя. В специальном аппарате проводится несколько циклов тепловых и охлаждающих процессов.

Обратите внимание

На конечном этапе полученный материал сопоставляется с генами вируса и делается заключение о наличии или отсутствии патологии в организме пациента.

Суть и проведение ПЦР анализа в лаборатории. Снято каналом SiberianMedicalLaboratory.

Виды исследования

Существует 3 вида диагностики, дающие возможность определять наличия вируса гепатита С в организме человека:

  • генотипирование;
  • качественный;
  • количественный.

Качественный метод

Диагностика гепатита С качественным методом применима для пациентов, у которых в анализе крови определены антитела к вирусу. В случае наличия острой фазы РНК ВГС подобные диагностические мероприятия позволяют определить наличие заболевания за 1-2 недели после инфицирования. В этот период антитела к гепатиту С могут быть ещё не выработаны.

ПЦР на гепатит С

Количественный метод диагностики используется для определения концентрации вируса в образцах крови. Подобный тест на виремию (степень концентрации) даёт возможность точно определить количество единиц вирусной РНК. Конечный результат выражается в соответственном объёме. Если речь идёт о количественном анализе, тогда показатели измеряются в 1 мл (1 куб. см).

Параметр вирусной нагрузки означает уровень инфекционности заболевания, то есть отображает степень «заразности» пациента. На практике это значит, что чем выше концентрация вируса в крови, тем больше шансов у пациента заразить окружающих гепатитом С. Количественный метод исследования также позволяет установить качество и результативность проведённого лечения.

Генотипирование

Генотипированием выявляют мутации возбудителя заболевания. Перед назначением лечебного плана определяют генотип вируса: от этого зависит качество и продолжительность терапии. Так, например, при лечении заболевания I-типа эффективность составляет 60%, в случае II, III-типа – около 80%.

Среди основных достоинств проведения процедуры выделяют:

  1. Возможность ранней диагностики. ПЦР анализ способен определить наличие вируса на ранних стадиях заражения.
  2. Низкая погрешность результатов. Исследуемый биологический ресурс позволяет диагностировать участок генетического материала, который является характерным только для одного типа вирусной инфекции. Это обстоятельство позволяет не допустить ложных результатов диагностики.
  3. Высокая степень чувствительности. Анализ ПЦР способен выявлять РНК вируса в небольших количествах, что также дает возможность вовремя отследить скрытые инфекции.

Сдавать анализ ПЦР на гепатит C нужно, если есть:

  • наличие контактов с больными людьми, которое могло бы привести к заражению;
  • симптомы заболевания цирроза печени (увеличение селезенки, нехарактерные изменения размеров печени, обнаружение на животе венозного сплетения под кожей);
  • положительные результаты ИФА;
  • увеличение активности АСТ и АЛТ (проявляется в биохимическом анализе крови);
  • необходимость контроля ведения антивирусной терапии;
  • проведение начального этапа лечения для необходимости установления вирусной нагрузки;
  • проведение завершающего этапа терапии для исключения возможных рецидивов;
  • наличие у пациента гепатита В, чтобы исключить вариант развития смешанного поражения печени.

ПЦР на гепатит: качественный и количественный анализ

Подготовка к ПЦР анализу включает следующие рекомендации:

  • забор крови проводится утром;
  • анализ проводится натощак, поэтому желательно выдержать перерыв между последним приёмом пищи 8-10 часов;
  • за несколько дней до проведения диагностики следует исключить жирную, острую и жареную пищу, алкогольные напитки и курение;
  • за сутки до анализа следует воздержаться от тяжёлых физических нагрузок, исключить занятия в спортзале или бассейне.

Сам анализ делается недолго, а расшифровывает результаты ПЦР на гепатит С высококвалифицированный специалист гепатолог или инфекционист. На основании результатов анализа пациенту выставляется диагноз.

Чтобы правильно расшифровать результаты обследования, учитывают показатели:

  • биохимического анализа крови;
  • данные ультразвукового исследования;
  • результаты биопсии.
Показатель Характеристика
Не обнаружено Норма здорового человека.Данный показатель обозначает, что в организме человека не присутствует генетический материал вируса или его концентрация ниже порога чувствительности.
До 1,8*10^2 МЕ/мл Значение подобных результатов изучается с повышенной осторожностью, так как необходимо соотношение информации с другими видами диагностирования. Такой результат требует повторного проведения процедуры, ввиду того, что концентрация РНК возбудителя ниже порога количественного определения.
До 8*10^5 МЕ/мл Вирусная нагрузка данного параметра считается низкой. Снижение концентрации вируса говорит о том, что лечебные мероприятия проводятся эффективно.
Больше 8*10^5 МЕ/мл Высокая вирусная нагрузка, следует пересмотреть подход к лечению.
Больше 2,4*10^7 МЕ/мл В этом случае концентрация РНК возбудителя достигает запредельных отметок, поэтому делать выводы об уровне вирусной нагрузке нет смысла. Чаще всего при таком результате назначается повторный тест с разведение частиц крови.
Показатель Характеристика
Обнаружено Если зафиксирован положительный ответ, это значит, что в исследуемом образце крови присутствует генетический материал вируса. Простыми словами – подтверждается факт заражения человека.
Не обнаружено Если в конечном итоге выходит отрицательный ответ, значит, заражение не произошло или количество РНК вируса недостаточно для определения чувствительности.
  1. В первом случае выявляют в крови больного возбудителя и устанавливают его генотип. Генотипирование нужно для правильной диагностики, прогноза болезни и выбора тактики лечения.
  2. Если вирус гепатита С методом ПЦР в крови обнаружен, проводится количественное исследование. Последнее помогает высчитать количество молекул РНК возбудителя, находящихся в биологической жидкости пациента.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

Составляющие анализа:

  • количественный анализ;
  • качественный;
  • генотропирование.

Благодаря тесту можно выявить генетику вирусной инфекции, а также стадию его развития в организме пациента. В зависимости от того, насколько система диагностики чувствительна, анализ моет проводиться либо один раз либо несколько – для подтверждения результата, используя более чувствительный реагент.

В чем преимущества метода полимеразной цепной реакции перед другими диагностическими способами?

  1. Широкий спектр применения. С помощью ПЦР, используя типовое оборудование, можно определить любой вирус.
  2. Точность определения возбудителя. Применяя различные комбинации ферментов и технику проведения анализа, достигается 100% спецификация исследования для обозначенной инфекции.
  3. Высокая чувствительность. Методика позволяет выявить присутствие в крови одной молекулы вируса.
  4. Оперативность. Качественный анализ бывает готов через несколько часов, количественный – через двое суток.
  5. Диагностика вируса в инкубационном периоде. При ПЦР возбудитель определяется не по наличию антител, когда уже имеется иммунная реакция организма, а до начала патологического процесса, что облегчает лечение.

Недостатки ПЦР являются следствием ее достоинств:

  • для чистоты анализа требуется высочайшая степень чистоты, в том числе воздуха в лаборатории, чтобы «чужие» ДНК не попали в исследуемый образец;
  • высокие требования к персоналу, осуществляющему забор и анализ биоматериала.

Важно! Оценку полученным результатам должен делать лечащий врач, умеющий отделить подлинный анализ от ложноположительного (когда лечение уже закончено, но в крови остается нежизнеспособный вирус) и ложноотрицательного (когда при клинической картине вирус не обнаружен).

Как подготовиться и сдавать кровь

В течение дня у человека меняется соотношение эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, а также активность некоторых гормонов. Прием пищи влияет на наличие жирных кислот в крови. Этот фактор мешает точности анализа. По этим причинам анализ ПЦР на гепатит С проводится утром натощак. В качестве исследуемого образца берется кровь из вены.

Перед сдачей анализа требуется подготовка:

  1. за 2-3 дня – ограничить нагрузку на печень (исключить алкогольные напитки, не употреблять жирную и жареную пищу);
  2. за сутки – исключить стресс, поднятие тяжестей, посещение спортзала и бассейна;
  3. за 8 часов – прекратить употребление любой пищи, так как глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь, изменяют качество ферментной реакции;
  4. с утра до момента сдачи крови – не курить.

На результат анализа может повлиять повышение концентрации адреналина в крови. Чтобы исключить эту погрешность, нужно прийти на 20 минут раньше, отдышаться и успокоиться.

На эффективность анализа крови могут влиять разные препараты – БАДы, средства с кофеином, этанолом, глюкозой, леводопой, пероральные контрацептивы, антибиотики. Даже если человек принимает обычные витамины, об этом нужно предупредить врача.

Молекулярно-биологический анализ назначается при положительном результате скринингового обследования на гепатит – ИФА и качественной ПЦР. Исследование применяется для:

  • определения уровня виремии (вирусной нагрузки);
  • прогнозирования течения болезни;
  • оценки результативности лечения;
  • диспансерного обследования после ПВТ.

ПЦР-диагностика рекомендована всем людям с вирусным гепатитом. Точность исследования варьируется в пределах 97-99%, поэтому риск ложных результатов минимален.

Показания для анализа:

  • обнаружение антител к вирусу гепатита С (anti-HCV);
  • признаки воспаления печени;
  • качественное выявление РНК ВГС;
  • острый и вялотекущий гепатит;
  • микст-гепатиты.

Количественный тест выполняется на всех этапах заболевания. Чтобы оценить результативность терапии, вирусную нагрузку определяют перед, во время и после ПВТ. Если уровень виремии высокий, увеличивается риск цирроза и рака печени. Поэтому для профилактики осложнений назначают антивирусные средства в больших дозах.

Рнк вируса гепатита с количественное исследование норма

У 75–80 % болезнь переходит в хроническую форму, что вызывает фиброз печени — состояние, при котором ткани печени заменяются соединительной тканью. Фиброз, в свою очередь, приводит к раку или циррозу. Основной путь передачи заболевания — через кровь.

Если у человека имеются показания к проведению теста на гепатит С, ему проводят два основных теста. Определяют антитела к вирусу, и при их отсутствии считается, что гепатита у него нет.

Если же в крови обнаруживается наличие антител к вирусу гепатита, проводится анализ методом ПЦР.

РНК таким методом определяется в крови уже через 10–12 дней после инфицирования и свидетельствует о том, что вирус активно размножается в организме. В этот период обнаружить вирус другим способом просто невозможно, так как специфических антител он еще не вырабатывает и поражения печени еще незаметны при биохимических анализах и биопсии.

Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества:

  1. При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя.
  2. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов.
  3. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови.

Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса. Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой.

Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой.

Первичная диагностика вирусных гепатитов включает только 2 анализа – ПЦР и ИФА. Дополнительное обследование выполняется только в случае выявления HCV-инфекции.

Стоимость диагностики при подозрении вирусного гепатита

Анализ Цена в рублях
ИФА 550-600
ПЦР (качественная) 260-350
ПЦР (количественная) 300-350
генотипирование 600-700
коагулограмма 1100-1200
печеночные пробы 1300-1400
УЗИ печени 1100-1200
аспирационная биопсия печени 5000-5500

Анализы на гепатит С – это исследования, направленные на выявление возбудителя и оценку функционального состояния печени. От правильности постановки диагноза зависит результативность ПВТ и шансы на положительный исход лечения.

Метод полимеразной цепной реакции впервые был запатентован в 1983 году Кэри Мюллисом. Внедрение в клиническую практику молекулярно-биологического анализа совершило переворот в диагностике бактериальных, грибковых и вирусных болезней.

ПЦР количественный при гепатите С – исследование, при котором подсчитывается количество РНК ВГС (HCV RNA). По результатам определяют вирусную нагрузку, от которой зависят:

  1. дозировка медикаментов;
  2. продолжительность противовирусной терапии (ПВТ);
  3. вероятность осложнений;
  4. успешность лечения.

РНК вируса гепатита С (ВГС) обнаруживается спустя 10-12 суток после заражения, когда до первых симптомов еще далеко. Поэтому исследование применяется для ранней диагностики HCV-инфекции.

Данные количественной ПЦР, в МЕ/мл Трактовка
не обнаружено вариант нормы, вируса в крови нет
менее 150 содержание РНК ниже линейного диапазона концентраций, минимальная вирусная нагрузка
150-3*104 низкий уровень виремии
от 3*104 до 8*105 средняя вирусная нагрузка
более 8*105 содержание РНК ВГС выше линейного диапазона концентраций

Вирусная нагрузка – важный показатель, который учитывается при разработке схемы терапии. Если уровень виремии минимальный или низкий, прогноз течения гепатита и результативности ПВТ благоприятный. Ситуация ухудшается при средней и высокой вирусной нагрузке. Такие пациенты подвержены осложнениям – фиброзу, жировому гепатозу, циррозу.

Уровень виремии не отражает степень повреждения печеночной паренхимы или тяжесть течения гепатита. Чтобы определить серьезность изменений в печени, прибегают к инструментальному обследованию – фибросканированию, биопсии и гистологическому анализу.

  1. типа анализируемого биоматериала;
  2. чувствительности применяемой тест-системы;
  3. количества определяемых инфекций.

Примерная стоимость лабораторного анализа

Тип анализа Цена в рублях
забор крови 170-200
качественная ПЦР 750-1000
количественная ПЦР (реал-тайм) 3800-4000
генотипирование 1350-1400

Анализ ПЦР на гепатит С делается не более 3 часов. Забрать окончательные результаты можно уже в течение 1-2 суток.

ПЦР на гепатит: качественный и количественный анализ

По принятой классификации ген обозначается числом, а подтип маленькой латинской буквой.

Расшифровка таблицы генотипов вируса С:

  • Генотип 1а, 1b, 1с
  • Генотип 2а, 2b, 2с, 2 d
  • Генотип 3а, 3b, 3с, 3d, 3e, 3f
  • Генотип 4а, 4b, 4с, 4d, 4e, 4f, 4g, 4 h, 4 i, 4 j
  • Генотип 5 а
  • Генотип 6 а

Самые распространенные генотипы 1,2,3. В России чаще всего встречаются 1а, 1b, 2 и 3 штаммы вируса С.

Генотип вируса 1b труднее других поддается лечению, в 90% переходит в хроническую форму, из которых 30% перерождаются в рак или цирроз печени.

Генотипы 2а и 3а имеют степень хронизации 33-50 %, более отзывчивы на противовирусную терапию.

При подтверждении присутствия вируса проводится ПЦР количественный на гепатит С, с помощью которого рассчитывают количество молекул РНК, находящихся в лабораторном образце больного.

Рассматриваемый анализ также может называть анализ ПЦР на гепатит С качественный. Обычный уровень чувствительности теста, который позволяет определить присутствие вируса – от 10 до 500 МЕ.

При отрицательных показателях можно говорить о том, что уровень вируса в крови пациента значительно меньше порога чувствительности теста.

В случае, если результаты тестов ничего не показали, доктору необходимо немного больше узнать о пороге чувствительности пациента.

Количественную диагностику ПРЦ следует проводить прежде чем назначать лечебную терапию, ну и конечно же после проведенных процедур, примерно на 12 недели лечения. Данная процедура необходима для того, чтобы удостоверится в правильности лечебной терапии. Вирусная нагрузка дает возможность определить 3 главных показателя болезни:

  • продолжительность и прогноз противовирусного лечения (чем большей будет вирусная нагрузка, тем длительней будет терапевтический курс);
  • эффективность, а также метод терапии;
  • инфекционность, то есть степень риска передачи вируса от зараженного человека к здоровому.

Данный вид диагностики зависит от вида лабораторного теста, а также от порога чувствительности.

Как подготовиться и сдавать кровь

Количественный анализ ПЦР проводится в лабораторных условиях. Домашних тестов для выявления числа вирусов в крови не существует.

Объективность результатов зависит от правильности подготовки к исследованию. Чтобы снизить вероятность погрешностей, нужно:

  1. сдавать венозную кровь натощак;
  2. выполнять процедуру до 12 часов дня;
  3. не есть за полсуток до визита в лабораторию;
  4. отказаться от газированных напитков и кофе в день обследования.

Забор крови у женщин рекомендуется выполнять за 1-2 дня до менструации. В этот период иммунная защита ослабевает, поэтому сывороточная концентрация возбудителя максимальная.

За 5-7 суток до анализа исключают алкогольные напитки, жирную и острую пищу. Врачи не советуют курить за 2-3 часа до забора крови.

Точность ПЦР-диагностики на гепатит С во многом зависит от правильности сбора и транспортировки биоматериала:

  • забор крови осуществляют в условиях процедурного кабинета;
  • пользуются только одноразовыми стерильными шприцами;
  • для исключения заражения биоматериала соблюдают правила асептики и антисептики.

Контейнер с пробой маркируют в присутствии пациента, после чего отправляют в лабораторию.

Для осуществления процедуры берут кровь из вены. Это лучше выполнять утром натощак.

Больному необходимо правильно подготовиться к ПЦР анализу на гепатит С:

  • За 10 часов до манипуляции исключить прием пищи, допускается употреблять чистую воду.
  • За день до процедуры исключить прием алкогольных напитков, за 4 часа до анализа не курить.
  • Перед исследованием не подвергаться физическим нагрузкам и эмоциональным потрясениям.
  • За 2 дня до взятия крови для проведения ПЦР на гепатит С перестать принимать лекарственные препараты. Если данное условие не выполняется, следует поставить в известность лаборанта, поскольку употребление некоторых лекарств приводит к ошибочно положительному результату исследования.

Как выполняют подсчет вирионов

Во время количественной ПЦР возбудителя идентифицируют путем обнаружения РНК в плазме крови. Это возможно за счет удвоения участка нуклеиновой кислоты вируса в среде фермента РНК-полимеразы. Во время анализа копируются (амплифицируются) только определенные участки генома.

Подсчет количества РНК вируса гепатита осуществляют в 3 этапа:

  1. Выделение генетического материала. Чтобы очистить вирусную РНК от крови и белковых включений, биоматериал пропускают через сорбенты, отмывают в растворе, центрифугируют, а потом обезвоживают. В результате остается осадок с вирусными частицами, который растворяют в специальной жидкости. На выходе получается РНК вируса гепатита в элюенте.
  2. Амплификация. Анализ выполняется в приборе-термостате, в котором периодически подогревают и охлаждают пробирки. При одном исследовании делают до 35 циклов, состоящих из 3 фаз: денатурация (разрушение) РНК, отжиг и синтез нуклеиновых кислот матричной цепи. За несколько десятков циклов в пробирке образуется множество фрагментов РНК, достаточное для подсчета количества генетического материала.
  3. Электрофорез. Пробирку с копиями вируса гепатита помещают в агарозный гель. Образец подключают к источнику тока, под действием которого фрагменты РНК разделяются. Благодаря электрофорезу копии нуклеиновых кислот становятся различимыми в свете ультрафиолета. Затем с применением специального оборудования подсчитывают количество РНК вируса.

В настоящее время для определения уровня виремии все чаще проводят ПЦР-диагностику в реальном времени (Real-Time PCR). В отличие от стандартного анализа, в образец крови вводят раствор с флуоресцентными метками. Благодаря этому удается подсчитать количество амплифицированной РНК ВГС в реальном времени после каждого цикла.

Генотропирование

Так как HCV имеет высокую активность в плане мутации, при проведении теста необходимо определить, какой генотип вируса присутствует у больного в крови. Существует 11 генотипов вируса гепатита С, они также делятся на разные субтипы.

Следует помнить о том, что данный этап анализа крайне важен, потому что благодаря нему доктор может сделать выводы об фазе вируса, назначить подходящее лечение, а также выписать пациенту наиболее эффективные препараты.

Также следует отметить, что благодаря генотипироанию можно также понять, в каком состоянии находится печень. К примеру, часто генотип 3 протекает совместно с стеатозом, который способствует накоплению жира в клетках печени.

Анализ крови на ПРЦ способен определить генотип заболевания. В некоторых случаях тестовые системы не могут определить вирус. В таком случае можно получить результат “не типируется”. Подобный результат анализов говорит о том, что генотип вируса не характерен для определенной территории. В подобных случаях нужно провести повторные анализы но уже с высшим пороком чувствительности.

Проведение анализа ПЦР на гепатит С и расшифровка результатов

Качественное исследование может быть:

  • положительным;
  • отрицательным.

Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии вируса гепатита в крови.

Положительный анализ говорит о выявлении РНК возбудителя определенного штамма.

Достоверность ПЦР анализа на гепатит составляет 95%. 5% —ошибка из-за халатности персонала. Такое случается вследствие повышенных требований к выполнению анализа:

  • соблюдение определенных условий хранения реактивов;
  • высокая квалификация медицинских работников;
  • чистота взятого материала.

Количественное ПЦР исследование на гепатит дает возможность оценить вирусную нагрузку на организм. Анализ позволяет:

  • уточнить стадию болезни;
  • узнать эффективность противовирусной терапии;
  • определить необходимость проведения биопсии печени.

Иногда пациент не ощущает себя заболевшим, а ПЦР анализ выявляет инфицирование. Это говорит о ранней стадии болезни или хронической форме. Для точной диагностики следует провести дополнительные исследования и начать адекватную противовирусную терапию.

Государственные учреждения выполняют анализ на бесплатной основе. Достаточно направления от врача-инфекциониста или гепатолога.

Платно исследование делают во всех больших городах нашей страны. Цену определяют тип исследования, имеющееся оборудование, время, затраченное на анализ.

  • Качественная ПЦР диагностика в Москве и Санкт-Петербурге будет стоить 600-900 руб. В области –300-800 руб.
  • Количественный ПЦР анализ на гепатит С обойдется в 17000-22000 руб., на гепатит В — 1200-10000 руб.

Качественный ПЦР анализ имеет два ответа:

  • отрицательный;
  • положительный.

ПЦР отрицательный означает, что возбудитель в образцах крови не обнаружен.Положительный ответ свидетельствует об обратном: обнаружены РНК того или иного генотипа вируса С.

РНК-анализ на гепатит С

Вероятность достоверности результата равна 95%. Остальные 5% — это ошибка по вине человека. Такая возможность допускается из-за высоких требований к проведению исследования:

  • правил хранения реактивов;
  • соответствующей квалификации медперсонала;
  • чистоты биоматериала.

Сам набор ПЦР имеет 100% диагностическую точность.

Количественный ПЦР РНК гепатита С позволяет определить вирусную нагрузку на организм больного. С его помощью:

  • уточняется стадия заболевания (острая, хроническая);
  • определяется эффективность противовирусного лечения;
  • выясняется необходимость биопсии печени.

В некоторых случаях больной не ощущает никаких признаков болезни, в то время как методом ПЦР установлено инфицирование ВГС. Это означает, что заболевание находится на ранней стадии развития либо в хронической форме. Для уточнения диагноза необходимы дополнительные исследования, для скорейшего начала противовирусного лечения.

В настоящее время используются три метода ПЦР:

  1. качественный (тест на наличие или отсутствие вируса);
  2. количественный (тест на концентрацию вируса в крови);
  3. с генотипированием (определяет принадлежность HVC к конкретному генотипу и субтипу).

Качественный анализ

Качественный анализ – это метод диагностики гепатита С, который позволяет подтвердить или опровергнуть присутствие вируса в крови. Выявляет наличие в определенной концентрации – в пределах 10-500 МЕ/мл. Выполняется в течение 1-4 дней и дает следующие результаты:

  • «Не обнаружено» – вирус отсутствует либо его концентрация так мала, что реагент его не распознает.
  • «Обнаружено» – вирус HCV присутствует, и его концентрация выше минимального порога чувствительности. Анализ выдает такой результат уже на 3-4 день после заражения.
Количество вируса (МЕ/мл) Расшифровка
Нет Вирус отсутствует или количество HCV недостаточно для того, чтобы тест на него среагировал.
Менее 1,8х10^ Концентрация вируса ниже линии границы.
Менее 8х10^ Количество незначительное, соответствует началу заболевания. Прогноз благоприятный.
Более 8х10^ Количество высокое, требуется лечение.
Более 2.4х10^ Концентрация вируса выше линейного диапазона. 

В результатах анализов очень часто можно увидеть степени, которые обозначаются как «^», например, 6*10^5 МЕ/МЛ, 10 в пятой степени это 100 тысяч, соответственно 6*10^5 МЕ/МЛ = 600 000 МЕ/МЛ.

10^2 = 100

10^3 = 1000

10^4 = 10 000

10^5 = 100 000

10^6 = 1 000 000

Просто подставляйте результат вашего анализы, который стоит перед знаком умножить, и вы получите результат. Учтите, что единицы измерения могут отличаться (копий/мл, ме/мл).

Количественный анализ ПЦР на гепатит С необходим для оптимального выбора препарата. С его помощью можно прогнозировать осложнения и эффективность терапии. Он позволяет оценить степень заразности носителя гепатита для окружающих: чем большее число вирусов насчитывается в крови, тем больше риск заражения.

Генотипирование

Сегодня известно, что у гепатита С имеется 11 генотипов и огромное количество субтипов. В разных странах есть свои приоритетные разновидности. В России в основном встречается 1 генотип (1b чаще, чем 1а), на втором месте по распространенности – 3 генотип (субтип 3а), на третьем – 2.

У каждого генотипа свои особенности. Зная их, можно спрогнозировать характер течения инфекции, риск перехода в хроническую форму и вероятность ответа на противовирусную терапию. Например, 3 генотип HCV провоцирует стеатоз, а 1 генотип требует лечения в течение 48 недель. По рекомендациям Минздрава генотипирование должно предшествовать противовирусной терапии.

Качественный ПЦР гепатита С

Исходя из результатов, врач определяет противовирусный препарат, его дозировку, курс приема.

Качественный метод

09.04.2018

Когда необходимо определить наличие вируса гепатита С в организме, следует провести анализ РНК, расшифровка которого и даст нужную информацию.

С помощью этого анализа можно выяснить, есть ли у пациента следы заболевания, а также определить, как далеко оно зашло, о каком именно типе патологии идет речь.

После выяснения этой информации можно назначать терапию наиболее подходящего вида.

Когда необходимо определить наличие вируса гепатита С в организме, следует провести анализ РНК, расшифровка которого и даст нужную информацию

РНК вируса гепатита С представляет собой генетическую структуру заболевания, которое поражает, в первую очередь, печень. Процесс заражения происходит, как правило, через кровь, поэтому наиболее часто заражение этим заболеванием происходит во время операций, проведенных плохо стерилизованными инструментами, или при переливаниях, если не были проведены все необходимые анализы.

Выясняя, что такое РНК гепатита и как можно заразиться этим заболеванием, нужно также отметить, что опасны все биологические жидкости. Поэтому при плотном контакте с больным нужно соблюдать большую осторожность.

Случаются и ситуации, когда анализ выявляет следы такой патологии у новорождённых детей, если их матери страдали этим заболеванием.

  1. Острая форма. Характеризуется болями в печени, резкими изменениями цвета кожи на желтоватый, рвотой, повышением температуры, часто приступ начинается после употребления алкогольных напитков или вредной пищи, особенно жирной и острой.
  2. Хроническая форма. На начальном этапе эта форма заболевания никак не проявляется и потому считается гораздо более опасной, чем острая. Именно пациенты, страдающие от хронического гепатита С, чаще всего сталкиваются с раком или циррозом печени.

При этом около 70% людей, столкнувшихся с острой формой болезни, рано или поздно приобретают и хроническую. Это зачастую характеризуется злокачественными изменениями структуры печени.

Основным анализом, определяющим содержание в крови РНК гепатита С, является HCV. Для него берётся кровь из вены, и такой метод называется также ПЦР. Определение методом ПЦР обнаруживает нуклеиновые элементы в крови, принадлежащие С-вирусу.

Определение методом ПЦР обнаруживает нуклеиновые элементы в крови, принадлежащие С-вирусу

  1. Качественное исследование. Позволяет определить, заражен ли пациент вообще инфекцией. Определение РНК этого заболевания почти всегда возможно, если болезнь зашла достаточно далеко. Ошибки могут возникнуть только на самом начальном этапе развития патологии, когда содержание её частиц в крови ещё слишком мало, чтобы быть обнаруженным и определенным.
  2. Количественное HCV-исследование. Это второй этап анализа, когда качественное исследование уже показало, что у пациента возникли проблемы. Количественный анализ позволяет определить, как сильно развилась болезнь.

Кроме того, после количественного проводится генотипическое исследование, с помощью которого можно также выяснить, каким именно видом болезни страдает пациент. В России активно распространены всего три, и схемы лечения различаются.

Когда анализируется РНК, результаты HCV, необходимые для правильного лечения, включают в себя три основных пункта:

  1. Положительный или отрицательный результат дал качественный анализ на гепатит РНК. В этом случае, что значит получение положительного результата: в первую очередь, вероятность заражения для окружающих. При этом положительный HCV может указывать также на недавно перенесённый острый приступ заболевания, при котором в организме ещё остались следы. Однако, если результаты показывают, что не обнаружено следов этой патологии, это почти всегда значит, что пациент здоров. Иногда на начальном этапе болезнь может быть не выявлена. Это происходит из-за того, что тест может демонстрировать результат «РНК гепатита не обнаружено», если его содержание в крови крайне мало.
  2. Количество рибонуклеиновых кислот, когда тест все же дал положительный результат. Он позволяет определить то, насколько сильно успело развиться заболевание.
  3. Конкретный вид заболевания. Если расшифровываются тесты на гепатит, определение его вида — одно из важнейших условий для правильного лечения. Даже существующие в России типы этой болезни требуют разницы в подходе, и терапия в каждом отдельном случае будет выглядеть по-разному. Особенно сложной ситуация станет, если пациент болен каким-либо экзотическим видом. В результатах это часто отмечается прочерком в графе определения типа и требует дополнительного осмотра.

Если ПЦР анализ на гепатит С отрицательный, а ИФА положительный — что это значит?

Для того, чтобы расшифровать анализы, надобно обратиться к таким специалистам – инфекционисту либо гепатологу. Эти доктора смогут расшифровать полученные данные. В основном расшифровка результатов анализа крови, да и вообще любых анализов, для человека без медицинского образования, совершенно непонятны.

Количественный ПЦР гепатита С

К примеру, при отрицательном тесте на гепатит, и ИФА положительном, смело можно утверждать об отсутствии у пациента НСВ, но это не исключает того, что гепатит С пациент перенес намного раньше, при чем в острой форме.

Считается, что положительный ИФА говорит, о том, что в кровяном русле обнаружены антитела, произведенные после того, как вирус был в прошлом поражен. Однако в нынешней медицине этот анализ не считают достаточно надежным. Доктора его используют исключительно в качестве первичного скрининга. При диагностике болезни доктора отталкиваются от показателей ПЦР-тестов.

Выводы

Чтобы сделать анализ ПЦР используется кровь из вены. Обычно делают двойной забор биоматериала – для теста ПЦР и для ИФА. Чтобы результаты были точными и достоверными, нужно соблюдать некоторые правила забора биоматериала:

  • между употреблением еды и забором биоматериала должен быть выдержан временной промежуток – не меньше 8 часов;
  • кровь нужно сдавать на голодный желудок, в первой половине дня;
  • на протяжении суток перед анализом нужно отказаться от интенсивных физнагрузок;
  • перед тем, как сдавать анализ, надобно отказаться от употребления жареной еды и от питья спиртного.

https://www.youtube.com/watch?v=jJEbj6Tm-tM

Готовые результаты можно забрать на следующий день.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Информационный сайт